当前位置:农村养鸡_专业鸡鸭饲养技术,灾病防治_富农家禽网 > 疾病防治 > 一种防治鸡大肠杆菌病的中药复方的筛选

一种防治鸡大肠杆菌病的中药复方的筛选

文章作者:疾病防治 上传时间:2019-12-04

  鸡大肠杆菌病是由致病性大肠杆菌引起的,主要表现有胚胎和幼雏的死亡、 急性败血症、 气囊炎、 心包炎、 输卵管炎、 全眼球炎和大肠杆菌性肉芽肿等[ 1]。致病性大肠杆菌感染鸡后,鸡主要表现为精神委靡不振、 采食减少、 离群呆立或蹲伏不动、 冠髯呈青紫色、眼虹膜呈灰白色、 视力减退或失明、 羽毛松乱、 肛门周围羽毛粘有绿色或黄白色稀粪、 关节肿大、 不愿动或跛行[ 2]。由于致病菌株的血清型多样、 致病机理复杂,使用灭活疫苗和亚单位疫苗进行免疫接种易导致接种失败,常给养禽业造成无法估量的经济损失 [ 3 -4]。
现代研究表明,中药中抑菌或抗菌的成分很多,可作用于细菌繁殖的不同阶段和多个代谢环节,且不容易产生耐药性,具有改变、 抑制,甚至消除细菌的耐药性作用[ 5]。本试验在中兽医学理论指导下,以不同的药物为主配伍组方,对所拟方剂进行筛选,以期得到有较好疗效的治疗鸡大肠杆菌病的中药复方。
1 材料与方法
1. 1 试验动物
选用来自同一养殖场的同一批 1周龄健康三黄鸡 80 只,均按要求进行免疫接种,饲喂不含任何添加剂及药物的饲料,适应性饲养观察至 18 日龄,选用正常鸡进行试验。
1. 2 单味中药提取液抑菌试验
1. 2. 1 单味中药提取液的制备
将十大功劳、 黄芩、 大黄、 马齿苋、 地锦草、 鬼针草等 6 味中药各50 g。 分别加入 1 L 水,浸泡 30 min,煎煮 1. 5 h,过滤收集滤液,药渣再加入 1 L 水,煎煮 40 min,过滤,收集滤液,药渣再加入 1 L 水,煎煮 30 min,过滤,收集滤液,合并 3 次滤液,100 ℃ 下蒸发浓缩至 100 mL,再取 50 mL 第一次的浓缩液浓缩至 25 mL,即分别制得单味药材的提取液,提取液以 1 000 r/min 离心15 min,取上清液,在 105 ℃下灭菌,4 ℃保存备用。
1. 2. 2 菌液的制备
将菌株用划线法接种到普通琼脂平板上,37 ℃ 生化培养箱培养 18 ~ 24 h,勾取单个菌落,用灭菌的生理盐水稀释校正菌液浊度至0. 5 麦氏单位,即菌液浓度为 1. 5 × 108 CPU/mL,现配现用[ 6]。
1. 2. 3 药敏试验
采用牛津杯法及药敏纸片法对大肠杆菌进行药敏试验,观察并测量抑菌圈大小,根据表 1[ 7] 记录试验结果。牛津杯法: 采取无菌操作将灭菌的不锈钢小管,放在培养基上,轻轻地加压,使其与培养基之间零空隙,每个平板放 4 个,分别向各牛津杯中滴加一定数量的各种药液,勿使其外溢,并标记各种中药的名称。药敏纸片法: 自制 直径 6 mm 的滤纸片药敏纸片,高压灭菌烘干并浸泡于中药浓缩液中过夜,60 ℃烘干,无菌保存。
1. 3 中药复方抑菌试验
1. 3. 1 中药复方提取液的制备
按表 2 中各复方配比称取相应药材,其总重量为 120 g,然后加入2. 4 L 水,浸泡 30 min,煎煮 1. 5 h,过滤,收集滤液,药渣再加入 2. 4 L 水,煎煮 40 min,过滤,收集滤液,药渣再加入 2. 4 L 水,煎煮 30 min,过滤,收集滤液,合并 3 次滤液,100 ℃ 下蒸发浓缩至 240 mL,再取120 mL 第一次的浓缩液浓缩至 60 mL,分别制得 5种中药组合物的提取液,提取液以 1 000 r/min 离心15 min,取上清液在 105 ℃下灭菌,4 ℃保存备用。
1. 3. 2 药敏试验
采用牛津杯法进行中药复方的药敏试验,观察并记录试验结果,方法同 1. 2. 3。
1. 4 自拟中药复方对人工感染鸡大肠杆菌病的防治作用
1. 4. 1 模型建立
试验鸡胸肌注射大肠杆菌菌液0. 3 mL/只[ 8]( 菌液浓度为 1. 5 × 108CFU/mL) ,若鸡出现精神迟钝、 垂翅、 呆立、 食欲减少、 拉稀和呼吸困难; 鸡尸体剖检后,心包膜和肝脏有淡黄色纤维素薄膜,很容易从脏器表面剥离,心脏壁变薄,心包液增多,有纤维素渗出,气囊混浊等典型的特异性病变,并分离出相应的大肠杆菌[ 9],即证明模型建立成功。
1. 4. 2 试验分组与处理[ 10]
试验鸡饲养到 18 日龄,检查体况无异常现象后,将其随机分为模型组、空白对照组、 中药复方Ⅰ、 Ⅱ、 Ⅲ、 Ⅳ、 Ⅴ组、 氨苄西林钠对照组,每组 10 只。除空白对照组外,其余各组按 0. 3 mL/只,胸肌注射菌液。待鸡只出现大肠杆菌病的典型症状以后,模型组、 空白对照组灌服生理盐水、 阳性药物组肌肉注射氨苄西林钠,各中药复方组分别灌服相应中药复方提取液 0. 5 mL/只,每天 2 次,连用 7 d,具体见表 3。每天定时观察并记录鸡只的精神状况、 饮食、 粪便、 死亡等临床表现等。若试验鸡精神、 饮食、 排粪恢复正常,症状完全消失,即为治愈; 若出现精神、 饮食、 排粪有好转,症状明显减轻,则为有效; 若症状无好转甚至死亡,剖检有明显的心包炎、 肝周炎等典型大肠杆菌病变,即为无效[ 11]。
2 结果
2. 1 单味中药提取液对鸡致病性大肠杆菌的抑菌效果
由表 3 可知,本试验所选中药对致病性大肠杆菌均有一定的抑菌效果,牛津杯法抑菌效果优于药敏纸片法,且浓度为 1. 0 g/mL 的提取液抗菌效果较 0. 5 g/mL 的提取液抗菌效果好。当浓度为 1. 0g/mL 时,大黄、 地锦草的抑菌圈直径分别为 24 mm、22 mm,黄芩、 十大功劳的抑菌圈直径均为 16 mm,说明鸡致病性大肠杆菌对大黄、 地锦草高度敏感;对黄芩、 十大功劳中度敏感。
2. 2 中药复方对鸡致病性大肠杆菌的抑菌效果
由表 4 可知,当提取液浓度为 0. 5 g /mL 时,中药复方Ⅲ、 Ⅳ组对大肠杆菌的抑菌圈为 20 mm,中药复方Ⅰ、 Ⅱ、 Ⅴ组大肠杆菌的抑菌圈直径分别为 18 mm、16 mm、 16 mm,说明大肠杆菌对中药复方Ⅲ、 Ⅳ高度敏感; 对中药复方Ⅰ、 Ⅱ、 Ⅴ中度敏感; 当提取液浓度为 1. 0 g /ml 时,中药复方Ⅰ、 Ⅱ、 Ⅲ、 Ⅳ、 Ⅴ抑菌圈直径分别为 18 mm、 18 mm、 19 mm、 19 mm、 19 mm,说明大肠杆菌对中药复方Ⅰ、 Ⅱ、 Ⅲ、 Ⅳ、 Ⅴ中度敏感。根据抑菌圈大小综合考虑,当提取液浓度为1. 0 g /mL时,对大肠杆菌的抑制效果更好。

2. 3 自拟中药复方对人工感染鸡大肠杆菌病的治疗效果
2. 3. 1 造模结果
造模 5 d 后试验鸡出现精神迟钝、 垂翅、 呆立、 食欲减少、 拉稀和呼吸困难; 尸体剖检发现心包膜和肝脏有淡黄色纤维素薄膜,很容易从脏器表面剥离,心脏壁变薄,心包液增多,有纤维素渗出,肝脏质地变脆、 易碎,气囊混浊增厚有淡黄色渗出物等病变; 革兰染色镜检观察到大肠杆菌,并从肝脏、心脏分离出大肠杆菌,证明试验造模成功。
2. 3. 2 治疗结果
由表 5 可知,中药复方Ⅰ、 Ⅱ、Ⅲ、 Ⅳ、 Ⅴ组治愈率分别为 40% 、 62. 5% 、 71. 4% 、44. 4% 、 55. 6% ,死亡率分别为 20% 、 25% 、 14. 3% 、44. 4% 、 33. 3% ; 模型组治愈率为 11. 1% ,死亡率为66. 7% ,与模型组相比中药复方组均有一定的治疗作用,且中药复方 III 组治愈率最高,死亡率最低,说明中药复方 III 组治疗鸡大肠杆菌病效果较好。
3 分析讨论
根据中兽医及鸡大肠杆菌病的六淫辩证理论,鸡大肠杆菌病为湿邪致病。湿邪侵入机体使脾阳受困、 脾失健运,久之则化热而成湿热之邪。脾主运化,喜燥恶湿,具有消化、 吸收、 运输水湿的功能,脾运化水湿功能失常就会导致水湿停滞形成内湿,水湿停留于肠道形成腹泻。鸡大肠杆菌主要临床症状中,热邪结于肠可见拉黄色或绿色稀粪,热邪伤肝可见肝脏表面散布多量针头大的坏死点,热邪侵害心脏包膜,表现为纤维素性心包炎。因此,湿热壅积是鸡大肠杆菌病的主要病机和基本证候类型。
根据鸡大肠杆菌病的中兽医辨证,治疗时宜采用清热解毒、 燥湿止痢药为主药,所以方中选用黄芩、 大黄、 十大功劳、 马齿苋、 地锦草、 鬼针草等具有清热解毒、 清热燥湿、 凉血止痢的药物。本试验结果表明,黄芩、 大黄、 十大功劳、 马齿苋、 鬼针草、 地锦草等清热解毒药均有一定的抗大肠杆菌作用,其中大黄、 地锦草抗菌效果较好。此外,患病鸡抵抗力较差,下痢后易脱水,加之前面使用大苦大寒类的清热药易伤脾胃,耗损津液,所以在清热的同时应辅以健脾胃、 养阴凉血的药物,所以添加白术、 地黄作为辅药,白术的主要功效是健脾益气,燥湿利水; 地黄的主要功效是清热凉血,生津润燥。试验结果显示,各中药复方组在体外均有一定的抗菌效果,但Ⅲ组、 Ⅳ组的抗菌效果最好。因此,清热药、 祛湿药、 补虚药是治疗鸡大肠杆菌病时遣方用药的关键,认为在实际应用中这些药能取得良好的治疗效果。所以试验将上述中药按不同比例组成五个中药复方组,分别给鸡灌服进行体外抑菌试验,期望为临床治疗该病提供良好的理论基础。
根据前人研究表明,不同品种、 不同日龄的鸡对鸡大肠杆菌的敏感性不一样,国内常用 1 ~ 28 日龄的海蓝褐蛋鸡、 三黄鸡、 AA 肉鸡等用于试验,本试验选用 18 日龄的三黄鸡作为试验动物。蔡玉梅等[12]通过皮下注射的方式将 O1、 O2、 O78 菌种混合液接种于 12 日龄雏鸡,发现在菌液、 接种途径、 鸡日龄等不变的情况下,1. 5 × 108 CFU/mL 和 1. 8 × 108CFU/mL 2 个剂量组能够引起鸡发病率达到 100% ,死亡率分别为 83% 和 93% 。当前,国内外学者主要攻毒途径有腹腔注射、 胸肌注射、 气囊接种。周秀红等[13]研究了不同接种途径对人工诱发鸡大肠杆菌病的影响,结果发现,胸肌注射的致病性最强,其次是皮下注射。结合前人研究结果,将分离到的鸡大肠杆菌复壮后按 1. 5 × 108CFU/mL 的浓度给鸡进行胸肌注射,注射第 5 天时,发现鸡只拉稀,精神极度沉郁,并出现死亡,证明造模成功。在造模成功的基础上,给试验鸡灌喂试验所选中药复方,试验结果表明,与模型组比较,各给药组均有一定的治疗效果,但中药复方Ⅲ组治愈率为 71. 4% ,死亡率为 14. 3% ,效果较其他组好。
中药复方Ⅲ组中十大功劳泻热退火,地锦草清热解毒,利湿退黄,鬼针草清热解毒,共为君药。黄芩清肺,肺清则通调水道,而湿热下逐,肠肺复其燥金之气; 大黄取其清热泻火、 解毒作用,并借通便作用,使热毒下泄,共为臣药。白术的主要功效是健脾益气,燥湿利水; 地黄的主要功效是清热凉血,生津润燥,共为佐使药。诸药合用体现中兽医整体观念,辨证论治的基本原则,使遣方用药更有依据可循,也为中兽药治疗鸡大肠杆菌病提供了一定的理论基础。

本文由农村养鸡_专业鸡鸭饲养技术,灾病防治_富农家禽网发布于疾病防治,转载请注明出处:一种防治鸡大肠杆菌病的中药复方的筛选

关键词: 疾病防治